CAR-T（Chimeric antigen receptor therapy），是一种涉及个体T细胞修饰的个体化疗法，属于肿瘤免疫疗法中的一种。CAR-T技术是在原本的T细胞表面，接上特殊的嵌合抗原受体（CAR），嵌合抗原受体可以特异性识别肿瘤相关抗原（TAA）或者肿瘤特异性抗原（TSA）靶点，与靶点结合后将激活增殖T细胞的信号传递至胞内，引起T细胞激活和增殖，从而有效杀伤肿瘤细胞。作为2013年Science评选的癌症治疗三大利器之一，CAR-T已经在血液瘤中取得了较好的疗效，在实体瘤治疗中也具有潜力。
通过基因工程的方法构建CAR-T细胞通常是一个耗时的过程，安必奇生物为广大的科研工作者和医疗工作者提供一站式服务，旨在相对较短的时间内为客户构建具有功能的CAR-T细胞。我们在免疫学和重组稳定细胞株构建方面的技术能够为客户提供具有功能的CAR-T重组细胞。 目前已成功构建针对多种抗原的有功能效应的CAR-T细胞。
具体流程
选择靶点分子
目前关注的焦点为高特异性的肿瘤特异性抗原（TSA）和肿瘤相关性抗原（TAA）。例如针对血液病抗原：CD19、CD20、CD30、CD33、CD123、CD138等和针对实体瘤靶向抗原:EGFR、Her2、VEGFR、cMET、PSMA、GD2、CEA、SS1、IL-13R等。
设计CAR-T细胞
嵌合抗原受体通常由四个部分构成：抗原结合区（scFv），胞外铰链区（Hinge），跨膜区（Transmenbrane，TM）和胞内信号区（Signaling chain）。 现在已经发展到第四代CAR-T技术。
scFV的选择
scFV由抗体的重链可变区和轻链可变区及连接区构成，可以靶向肿瘤表面特定抗原分子。安必奇提供从靶点抗原分子制备，到单克隆抗体制备、scFV构建、人源化改造及亲和力成熟等服务。也可为客户提供多种预制抗体库，包括全人源的scFV抗体库，为客户筛选出高亲和力的scFV。
构建CAR分子
①CAR表达载体构建及病毒构建目前安必奇提供科研应用级别和临床应用级别的符合安全标准的高滴度的各种重组病毒包装服务，包括新型慢病毒和腺病毒、逆转录病毒等，还可以提供基于非病毒的转座子/转座酶系统的的第二、第三、第四代CAR-T技术服务。
②免疫细胞的分选
使用ThermoFisher 的Dynabeads® tube-based cell isolation系统，筛选分析人的原代T细胞。安必奇生物通过免疫磁珠、FCS等方法可以筛选出特殊类型的效应细胞，准确的分离和检测非常有效的T细胞亚群，用少量的细胞达到更佳的效果。
③T细胞的激活和增殖
模拟T细胞体内活化的流程，用包被抗CD3，CD28抗体的磁珠，体外激活T细胞并促进T细胞的增殖。
④重组CAR-T细胞获得
利用特定的转染方式转染人T细胞，使CAR基因在T细胞表面表达，也可以通过单克隆筛选出CAR基因整合入T细胞特定染色体位置的稳定过表达细胞株。通过FACS或者Western Blot检测重组CAR-T细胞表面CAR分子的表达水平。
CAR-T细胞的体外功能验证
CAR-T细胞可以直接识别并结合肿瘤表面的TAA和TSA，将信号传入T细胞内,刺激T细胞分泌细胞因子如穿孔素、颗粒酶、INF-γ、TNF-α等,从而发挥杀伤肿瘤细胞作用。因此CAR-T具体免疫功能测试内容包括:补体依赖性细胞毒实验、NK细胞介导的细胞毒实验和特异CTL活性检测等。
CAR-T的抗肿瘤活性评价
可以通过体内实验和体外试验两种方法检测CAR－T的抗肿瘤活性。体外试验：将CAR-T细胞和靶向肿瘤细胞共培养,CCK-8或者MTT法检测CAR-T细胞对靶细胞的裂解能力。体内实验：构建表达荧光素酶的靶向肿瘤细胞，用这种细胞构建裸鼠/小鼠的移植瘤模型，通过对不同分组的荷瘤动物进行不同的处理-不同时间、不同数量的尾静脉会输CAR-T细胞，连续监测动物体内肿瘤体积的变化和外周血中细胞因子的表达水平，来评价CAR-T细胞的抗肿瘤活性。
其他策略
Go-CAR、Armored-CAR、Suicide Gene Insert-CAR、双靶向CAR、iCAR等。
服务优势：
scFv选择多样性：安必奇为客户提供多种预制抗体库，包括全人源的scFV抗体库，为客户筛选出高亲和力的scFV。
多种表达载体：包括新型慢病毒和腺病毒、逆转录病毒等,还可以提供基于非病毒的转座子/转座酶系统的 的第二、第三、第四代CAR-T技术服务。
细胞分选准确：安必奇生物通过免疫磁珠、FCS等方法可以筛选出特殊类型的效应细胞, 准确的分离和检测有效的T细胞亚群，用少量的细胞达到更好的效果。
一站式解决方案，包括从人外周血中分离T细胞，使用病毒或者其他常见方法转染T细胞，以及筛选具有功能的T细胞。
CAR-T定制产品列表
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