蛋白质胶点鉴定

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胶点鉴定

对于较纯或者单一的蛋白样品,我们采用MALDI-TOF蛋白鉴定技术进行蛋白鉴定。除银染的蛋白质胶带样品之外,我们保证对每一个可见的蛋白质胶带的成功鉴定,没有成功的鉴定完全免费。

技术原理

基质辅助激光解吸附质谱技术(Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time Of Flight )的基本原理是将分析物分散在基质分子中并形成晶体,当用激光照射晶体时,由于基质分子经辐射所吸收的能量,导致能量蓄积并迅速产热,从而使基质晶体升华,致使基质和分析物膨胀并进入气相。离子在电场作用下加速飞过飞行管道,根据到达检测器的飞行时间不同而被检测,即测定离子的质荷比(M/Z)与离子的飞行时间成正比,从而检测离子。MALDI所产生的质谱图多为单电荷离子,因而质谱图中的离子与多肽和蛋白质的质量有一一对应关系。

MALDI-TOF质谱原理示意图 MALDI-TOF质谱原理示意图 技术流程 技术流程 技术特点
  • 适合较纯的样品,样品简单,容易检测;
  • 目标性强,速度快,通量高。
样本要求
  • 双向凝胶胶点:考染、银染(质谱兼容)点清晰可见;
  • SDS-PAGE胶条:考染、银染(质谱兼容)条带清晰可见,单一蛋白质,纯度>90% ;
  • 蛋白质溶液:单一蛋白质,纯度>90%。
技术平台
ABI 4800 MALDI-TOF/TOF
案例解析

高糖通过不同途径干扰胰岛素分泌细胞功能的蛋白质组学研究

胶点鉴定配图

慢性高血糖会导致β细胞的功能紊乱并诱导其加速灭亡,是2性糖尿病的一个主要指标。本研究以INS-IE细胞以及其在25mM葡萄糖处理下的两组细胞为研究对象,通过双向电泳(2D)实验寻找到100个显著性差异表达蛋白质。通过MALDI-TOF对这些差异蛋白质点进行鉴定后发现,高糖组是通过伴侣蛋白、蛋白质合成以及遍在蛋白等途径来扰乱细胞的正常生理功能,这些发现通过后续的功能检测试验得到验证。

参考文献
  • Bahr U, Deppe A, Karas M, et al. Mass spectrometry of synthetic polymers by UV-matrix-assisted laser desorption/ionization[J]. Analytical chemistry, 1992, 64(22): 2866-2869.
  • M Maris et al. High Glucose Induces Dysfunction in Insulin Secretory Cells by Different Pathways: A ProteomicApproach. J. Proteome Res., 2010, 9 (12), pp 6274–6287.
  • Fenselau C. Peer Reviewed: MALDI MS and Strategies for Protein Analysis[J]. Analytical chemistry, 1997, 69(21): 661A-665A.